تولید سلول های ناپذیرا برای مطالعه HIV-1 vif

author

Abstract:

سابقه و هدف: مولکول APOBEC3G ، به عنوان فاکتور سلولی دخیل در میانکنش با vif HIV-1 عمل می­کند که برای بررسی میانکنش آن با vif HIV-1 ، از سلول­های ناپذیرای طبیعی و ذاتی مثل H9 و PBMC انسانی مولد APOBEC3G استفاده می­شود. به دلیل ناکارآمدی آنها در این نوع بررسی­ها، نیازمند سلول­های ناپذیرایی بودیم که به طور ثابت و به میزان بالا تولید APOBEC3G بنماید. لذا از سلول­های 293T برای ایجاد این دسته از سلول­ها استفاده شد. مواد و روش­ها: از سلول­های 293T برای تولید سلول­های ناپذیرا ( non-permissive ) استفاده شد که این کار پس از ترانسفکشن با کلون­های مولکولی PcDNA-APO3G صورت گرفت و سپس با روش وسترن بلاتینگ، میزان بیان آنها بررسی شد. همچنین فعالیت رپلیکاسیون HIV-1 با استفاده از RT assay و عفونت­زایی آنها به وسیله MAGI assay بررسی شد. نتایج: در این مطالعه، تعدادی رده سلولی 293T ابرازکننده یک فاکتور انسانی ضد HIV-1 به نام APOBEC3G تهیه شد. به آسانی از طریق ایمونوبلاتینگ اثبات شد که چهار کلون از هفت کلون مورد بررسی، APOBEC3G را ابراز می­کنند. به ویژه مشخص شد که دو کلون (A3G-C1,A3G-C4) تولید مقادیر بالاتری از APOBEC3G را در مقایسه با کلون­های سلولی Pooled می­نماید. اثربخشی ترانسفکشن همه این کلون­ها مشابه سلول­های والد بود؛ با تولید سطح قابل قیاسی از ویریون­ها در نتیجه ترانسفکشن کلون­های DNA ویروسی نوع وحشی و vif منفی ( - vif ). به علاوه سطح ابرازی APOBEC3G در بهترین رده سلولی (A3G-C1) ، بسیار بالاتر از سطح ابرازی در یک رده سلولی لنفوسیتی APOBEC3G مثبت و سلول­های تک­هسته­ای خون محیطی بود. در نهایت دخول APOBEC3G در ویریون­های تولید شده در A3G-C1 مونیتور و پیگیری شد. APOBEC3G به راحتی در ذرات ویروسی پروژنی در نتیجه ترانسفکشن کلون پروویروسی vif منفی، و نه در کلون نوع وحشی، تشخیص داده شد. نتیجه­گیری: این نتایج مشخص ساختند که رده سلولی جدید تولید شده برای مطالعات مختلف بررسی میانکنش APOBEC3G انسانی و HIV-1 vif مفید است. 

Upgrade to premium to download articles

Sign up to access the full text

Already have an account?login

similar resources

تولید سلول های ناپذیرا برای مطالعه hiv-۱ vif

سابقه و هدف: مولکول apobec3g ، به عنوان فاکتور سلولی دخیل در میانکنش با vif hiv-1 عمل می­کند که برای بررسی میانکنش آن با vif hiv-1 ، از سلول­های ناپذیرای طبیعی و ذاتی مثل h9 و pbmc انسانی مولد apobec3g استفاده می­شود. به دلیل ناکارآمدی آنها در این نوع بررسی­ها، نیازمند سلول­های ناپذیرایی بودیم که به طور ثابت و به میزان بالا تولید apobec3g بنماید. لذا از سلول­های 293t برای ایجاد این دسته از سلول...

full text

APOBEC3F determinants of HIV-1 Vif sensitivity.

HIV-1 Vif counteracts restrictive APOBEC3 proteins by targeting them for proteasomal degradation. To determine the regions mediating sensitivity to Vif, we compared human APOBEC3F, which is HIV-1 Vif sensitive, with rhesus APOBEC3F, which is HIV-1 Vif resistant. Rhesus-human APOBEC3F chimeras and amino acid substitution mutants were tested for sensitivity to HIV-1 Vif. This approach identified ...

full text

Suppression of APOBEC3-mediated restriction of HIV-1 by Vif

The APOBEC3 restriction factors are a family of deoxycytidine deaminases that are able to suppress replication of viruses with a single-stranded DNA intermediate by inducing mutagenesis and functional inactivation of the virus. Of the seven human APOBEC3 enzymes, only APOBEC3-D, -F, -G, and -H appear relevant to restriction of HIV-1 in CD4+ T cells and will be the focus of this review. The rest...

full text

Insight into the HIV-1 Vif SOCS-box–ElonginBC interaction

The HIV-1 viral infectivity factor (Vif) neutralizes cell-encoded antiviral APOBEC3 proteins by recruiting a cellular ElonginB (EloB)/ElonginC (EloC)/Cullin5-containing ubiquitin ligase complex, resulting in APOBEC3 ubiquitination and proteolysis. The suppressors-of-cytokine-signalling-like domain (SOCS-box) of HIV-1 Vif is essential for E3 ligase engagement, and contains a BC box as well as an...

full text

HIV-1 and HIV-2 Vif interact with human APOBEC3 proteins using completely different determinants.

UNLABELLED Human APOBEC3 (A3) restriction factors provide intrinsic immunity against zoonotic transmission of pathogenic viruses. A3D, A3F, A3G, and A3H haplotype II (A3H-hapII) can be packaged into virion infectivity factor (Vif)-deficient HIVs to inhibit viral replication. To overcome these restriction factors, Vif binds to the A3 proteins in viral producer cells to target them for ubiquitina...

full text

HIV - 1 and HIV - 2 Vif Interact with Human APOBEC 3 Proteins Using Completely 1 Different Determinants

HIV-1 and HIV-2 Vif Interact with Human APOBEC3 Proteins Using Completely 1 Different Determinants 2 Jessica L. Smith, Taisuke Izumi, Timothy C. Borbet, Ariel N. Hagedorn, and Vinay K. Pathak* 3 Viral Mutation Section, HIV Drug Resistance Program, Center for Cancer Research, National 4 Cancer Institute, Frederick, MD 21702, USA 5 6 Running title: HIV-2 Vif-APOBEC3 interactions 7 8 *Address Corr...

full text

My Resources

Save resource for easier access later

Save to my library Already added to my library

{@ msg_add @}


Journal title

volume 12  issue 4

pages  22- 28

publication date 2009-01

{@ msg @}

By following a journal you will be notified via email when a new issue of this journal is published.

Keywords

No Keywords

Hosted on Doprax cloud platform doprax.com

copyright © 2015-2023